彗星法DNA损伤分析试剂盒，快速灵敏测试 - 海洋生物DNA分析

2 p/ `9 ?' h' N# ~" n! I

原标题：彗星法DNA损伤分析试剂盒，快速灵敏测试

/ p+ D$ Y8 u$ ^8 k( r- _

彗星检测试剂盒（3孔载玻片）是一种单细胞凝胶电泳检测（SCGE），用于检测细胞中DNA损伤的快速灵敏测试。其原理是，在器官或组织遭受（如辐射、重金属等）后，细胞中的单链或双链DNA断裂，将细胞与融化的琼脂混合并放在玻片上，然后用裂解溶液破坏细胞膜，用碱性溶液解开DNA。最后，对样品进行电泳，在电场的作用下，正常细胞的大分子DNA迁移较短的距离，完整的DNA保留在细胞核的范围内，DNA碎片从细胞核中迁移出来，用PI染料染色，在荧光显微镜下观察，完整的脱氧核糖核酸形成圆形或微辫状；DNA碎片形成彗星状图案。根据电泳缓冲液的pH值，可分为中性彗星试验（pH=8.4）和碱性彗星试验（pH>13）。中性彗星法主要用于检测DNA双链断裂损伤，碱性彗星法具有较高的灵敏度，可用于检测较少的单链和双链断裂损害。

艾美捷彗星法DNA损伤分析试剂盒：

- G3 K; L5 O: d* C2 D" Y

目录号：D-AKE3040

尺寸：15T

储存：在4°C下储存6个月，避光

彗星法DNA损伤分析试剂盒（3孔载玻片）:

套件组件尺寸（15T）储存条件

彗星载玻片（3孔）5 4℃

10×赖氨酸溶液15 mL 4℃

EDTA（500 mM）25 mL 4℃

琼脂（低熔点）15 mL 4℃

% F0 T5 Y& d r# H c

碘化丙啶（PI）（50x）20μL 4℃，避光

. ^) J2 t# c! @5 O

40 mM Tris-HCl（pH 7.5）15 mL 4℃

彗星法DNA损伤分析试剂盒试剂准备：

9 s; b. i# R3 F" F6 A$ y

彗星幻灯片（3孔）：随附随用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。10×赖氨酸溶液：供应即用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。EDTA（500mM）：供应时即用。使用前将其平衡至室温。储存温度为4℃。

琼脂（低熔点）：将琼脂（低沸点）瓶在90-95°C的水浴中加热20min，直到琼脂液化。将瓶子转移到37°C水浴中20分钟以保持液态。将其余部分等分并在4℃下储存。

碘化丙啶（PI）（50×）：使用前新鲜制备，用PBS稀释50倍至1×PI染料浓度，在4°C下储存并避光。

# h) X: Y# O7 \. U8 { w2 M

40 mM Tris-HCl（pH 7.5）：在使用前制备，用PBS稀释100倍至0.4 mM Tris-HCl（pH7.5）的浓度，并在4°C下储存。

, J- k( F3 E' Z! p$ _: k' t& w

1×裂解缓冲液：制备100 mL 1×裂解液

- Y+ y+ |7 H! V

可以使用以下方法之一测量尾力矩：

（a） 橄榄尾力矩=尾DNA%×尾力矩长度（从头部中心到尾部中心测量，见图1）

4 I9 f9 ~1 W7 {" X( k' [: G

（b） Extent Tail Moment=Tail DNA%×Tail Length（见图1）彗星测定结果分析软件可通过Opencomet、CASPlab和彗星测定IV（PerceptiveInstruments）等获得。

% u: E& v' k6 h P' w: F3 d

图1：彗星试验中的DNA损伤。

" T# @* _9 _$ w2 K& K

图2：定性方法：DNA损伤按尾DNA%的比例分为五级

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。返回搜狐，查看更多

6 q! f. v% t$ V) Y6 L

责任编辑：

5 ?! n+ G6 V; D' Y* A# c. ~ - _8 H& ~/ H- ~" o: F* a' n+ {% v